1、取出酶标记板，设置空白孔，在空白孔中依次加入100μL标准品。
2、分别标记样品编号，并添加100μL稀释样品置于空白微孔中。
3、将酶标记板在37℃孵育30分钟。
4、取出酶标签板，扔掉其中的液体，并在每个孔充满所用洗涤剂后立即扔掉液体。
5、在每个孔填充了应用的洗涤剂后，轻轻摇动酶标记板30秒，从孔中摇动应用的洗涤剂，并将酶标记板拍干在吸水纸上。
6、重复步骤55次，并将酶标签板拍干在吸水纸上。
7、将100加入酶标记偶联溶液的标准孔和样品孔μL中。
8、将96孔板在37℃孵育30分钟。
9、取出酶标签板，扔掉其中的液体，并在每个孔充满所施加的清洁剂后立即扔掉液体。
10、在每个孔重新填充洗涤剂应用溶液后，在室温下轻轻摇动酶标签板30秒，然后从孔中摇动洗涤剂应用溶液，并将酶标签板拍干在吸水纸上。
11、重复步骤55次，并将酶标签板拍干在吸水纸上。
12、将基板A50加入每个孔μl后立即加入基板B50轻轻摇动以混合。
13、酶标记板在37℃黑暗中孵育15分钟。
14、向每个孔中加入50μL终止溶液，轻轻摇动并混合。
15、在酶标记上的450nm处测量OD；显色后，应在15分钟内进行测定。
16、根据制备的标准曲线计算样品含量。
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