人受体ELISA试剂盒的实验原理及操作步骤介绍

　　人受体ELISA试剂盒的实验原理：
 

　　试剂盒采用间接法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人受体抗体(AIRA)捕获抗原的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗胰岛素受体抗体(AIRA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。
 

　　人受体ELISA试剂盒的操作步骤：
 

　　1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
 

　　2、设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
 

　　3、样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
 

　　4、除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
 

　　5、弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液(350μL)，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
 

　　6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
 

　　7、每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。