人细胞ELISA试剂盒的检测原理主要基于酶联免疫吸附测定技术。ELISA是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的免疫学检测方法,用于定量或定性分析液体样本中的抗原、抗体或蛋白质。
1、包被:首先将针对目标抗原的特异性捕获抗体固定在微孔板的各个孔内壁上,形成一层抗体膜。
2、封闭:为了避免非特异性结合,需要用封闭液填充未被捕获抗体占据的位点。
3、加样:将含有待测抗原的样本加入到包被有捕获抗体的孔中,抗原会与捕获抗体特异性结合。
4、洗涤:去除未结合的物质,通常使用洗涤缓冲液多次清洗。
5、加入检测抗体:加入针对同一抗原的另一表位的酶标记检测抗体,该抗体与抗原结合形成“夹心”复合物。
6、再次洗涤:去除未结合的检测抗体。
7、显色:加入酶的底物,酶标记的检测抗体会催化底物发生化学反应,生成可见的颜色产物。
8、终止反应:根据实验设计,可能需要加入终止液来停止颜色的发展。
9、读数:使用酶标仪测量每个孔的光密度(OD值),该值与样本中抗原的浓度成正比。
通过与标准曲线比较,可以计算出样本中抗原的浓度。ELISA试剂盒通常会提供一系列已知浓度的标准品,以建立标准曲线。
人细胞ELISA试剂盒的优点包括灵敏度高、特异性强、操作相对简单、可同时处理大量样本等。然而,ELISA结果的准确性和重复性受到多种因素的影响,包括抗体的质量、样本的处理和储存条件、实验操作的标准化等。因此,在进行ELISA实验时,需要严格按照说明书的要求操作,并采取适当的质量控制措施。