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ELISA试剂盒为什么重复性差?

 更新时间:2023-09-06 点击量:530

可能存在的原因有:

1. 试剂盒储存不当或储存环境差。您应按照数据表上的建议储存所有组分,而不是在室温下过长时间。

2. 标准的制备不正确。您应根据试剂盒的方案,使用推荐的稀释剂严格重构标准。在使用前的10分钟内准备好试剂,并迅速加入孔中。

3. 添加样本后混匀不充分。当同时添加多个试剂时,您应在涡旋混合器中充分混合试剂。在持有试剂时要小心,避免溅出。

4. 孔读数重复性差。您应校准酶标仪。

5. 孵育时间、洗涤条件、显色条件和操作者不一致。您应重复标准的实验。确保反应条件和操作者一致。

6. 洗涤不当。您应使用移液管加入200μL的洗涤缓冲液,或者用移液管充分填满每个孔,但不允许溢出。检查酶标板洗涤器的所有孔口,确保充分的洗涤。

7. 温度不均匀。您应在孵育期间保持恒定温度,避免温度波动。

8. 加样本时壁面残留过多或移液管尖划伤孔底。您应缓慢、小心地将移液管尖沿孔壁降低,避免触碰孔底。

9. 重复使用材料。您应在样本之间更换移液管尖,在试剂之间更换储液器。

10. 偶尔在截断值附近出现的阳性和阴性值。您应对同一样本设置3个重复测量,并在2个样本中获得相同的结果。

11. 加样本时的交叉污染。您应在添加样本时避免交叉污染。